免疫組化切片染色ABC Kit

簡介：

Santa 公司免疫組化染色ABC kit 適用於(yu) 兔、山羊、小鼠、大鼠來源的一抗冰凍切片或石蠟切片顯色，一個(ge) 盒子足夠染200張切片。

產(chan) 品信息：

試劑盒組成：(以ImmunoCruzT^M mouse ABC Staining System 為(wei) 例)

1. 1ml正常封閉血清
2. 250ug 生物素標記的二抗
3. 0.5ml親和素標記HRP（AB試劑）
4. 1ml 50X過氧化物酶底物
5. 1ml 50X DAB顯色液
6. 3ml 10 X底物緩衝液
7. 用於工作液製備的小瓶

客戶需自備的試劑：

1. PBS緩衝液
2. 0.1-1%雙氧水，溶於PBS、雙蒸水或甲醇
3. 一抗
4. 樣品固定試劑
5. 複染試劑（可選的）
6. 封片劑

操作流程：

所有步驟均在室溫操作，用足夠的試劑浸潤切片，一般100ul足夠或1-3滴工作液，避免在操作過程中樣本變幹。

1. （可選步驟）切片製備好以後，切片需用0.1-1%的過氧化氫（溶於PBS，去離子水或甲醇）孵育5-10min，以去除內源性過氧化物酶活性。用PBS衝洗兩次，5min/次
2. （可選步驟）切片用1.5%封閉血清（溶於PBS）孵育1h,如果沒有出現非特異性染色，該步驟可省略。
3. 切片用一抗室溫孵育30min或4℃孵育過夜。通過滴定法確定*的一抗稀釋度，推薦範圍：0.5-5ug/ml，用1.5%封閉血清（溶於PBS）。PBS洗滌3次，5min/次
4. 用生物素標記的二抗孵育切片30min，二抗濃度約1ug/ml，PBS洗滌3次，5min/次
5. 用AB酶試劑，孵育切片30min, PBS洗滌3次，5min/次
6. 用過氧化物酶底物溶液1-3滴孵育切片30s-10min或直至強顯色出現。如果需要的話，加入更多的過氧化物酶底物溶液，繼續孵育，用去離子水洗滌5min。
7. (可選步驟) 蘇木精複染5-10s，用去離子水洗滌數次。
8. （可選步驟）用酸乙醇脫色，染成藍色，水衝洗。
9. 對於石蠟包埋組織，用以下方法脫水：a.2 x 95%10s，2x100%乙醇10s，3x二甲苯10s。去除多餘的二甲苯
10. 立即加入1-2滴封片劑，蓋上蓋玻片，顯微鏡觀察。