骨切片

骨是一種很有活力的組織，在人的一生中都在不斷地重建。
每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質量。在該檢測中，由骨切片上產生凹點證明破骨能力。隨後用培養基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液。

骨切片（DT-1BON1000-96）

【預期用途】

用於(yu) 傳(chuan) 統染色法和培養(yang) 基ELISA（CrossLaps）骨破壞重吸收的體(ti) 外精確檢測

【產(chan) 品簡介】

       骨是一種很有活力的組織，在人的一生中都在不斷地重建。現已證實，在骨中存在一些特殊物質，能夠影響到破骨細胞的活性。因此我們(men) 使用高質骨而不是牙質應用於(yu) 研究。現在將向我們(men) 的客戶提供此類服務。

每批骨切片通過重吸收檢測法來測試其質量。在該檢測中，由骨切片上產(chan) 生凹點證明破骨能力。隨後用培養(yang) 基酶免吸附試劑盒Crosslaps檢測上清液。隻有當兩(liang) 項測試都呈陽性時，該骨切片才能用於(yu) 進一步的重吸收檢測。

       破骨細胞產(chan) 生凹點的活性通過人破骨重吸收方法檢測。對破骨重吸收的定量分析可以采用傳(chuan) 統的對凹點染色方法，亦可使用培養(yang) 基酶免吸附檢測法Crosslaps。由於(yu) 破骨細胞實驗往往需要較大量的蛋白質，而從(cong) 牛骨切片中提取的蛋白質用於(yu) 96孔板。

       將人破骨細胞分散覆蓋於(yu) 牛骨皮質片上，然後加入不同濃度的抗重吸收劑（A: 90 μM, B: 30 μM, C: 10 μM, D: 0 μM）。第6天取等量細胞培養(yang) 上清液用於(yu) 檢測膠原c端交聯肽（ctx）的量（培養(yang) 基ELISA-CrossLaps）,從(cong) 骨片上轉移破骨細胞並且用阻凝蛋白蘇木精染色，形成可見的凹點。

       我們(men) 正使用這種6孔板大骨片（GBS）來提取破骨細胞蛋白，這些破骨細胞在骨上而非塑料上培養(yang) ，對蛋白質的表達是有影響的（數據未列出）。要進行破骨細胞的基因描述實驗時，我們(men) 推薦使用這些底物提取RNA。從(cong) 骨切片分離RNA的方案和人破骨細胞的培養(yang) 方案可根據要求製定。

【來源】

骨切片由牛股骨的皮質部分製成，適合96孔板，直徑6mm，大概200μm厚。

【儲(chu) 存】

骨切片保存於(yu) 4°C下70%乙醇中。為(wei) 了保持骨切片的質量，應縮短使用周期和避免室溫下放置。

【處理】

我們(men) 推薦在轉移至96孔板之前，先將骨切片置於(yu) 含培養(yang) 基的10%血清中清洗三次。

【培養(yang) 】

重吸收實驗一般持續72小時。然而在加入試劑到破骨細胞培養(yang) 液中16或24小時後，就可觀察到細微的變化了，甚至8小時後即可用相應方法觀察到。

【特征】

與(yu) 凹點染色和劃線不同，培養(yang) 基酶免吸附法Crosslaps不要求破骨細胞培養(yang) 的終止。因此，可以從(cong) 相同的股切片中獲得幾個(ge) 樣品，從(cong) 而使互換性檢測特定物質影響下的破骨細胞活性成為(wei) 可能。材料的處置與(yu) 常見細胞培養(yang) 物的處置相同。

【參考文獻】

1.       HENRIKSEN ET AL. AM J PATHOL 164:1537-1545 (2004).

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4.       KARSDAL ET AL. AM J PATHOL 166:467-476 (2005).

5.       SCHALLER ET AL. J BONE MINER RES 19:1144-1153 (2004)

      6.       STROUP ET AL. J BONE MINER RES 16:1739-1746 (2001).

骨切片

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